Vettori di Lievito

Possono accettare inserti grandi fino a 2Mb!  componenti essenziali di un vettore YAC sono: un centromero di lievito (CEN); una sequenza di replicazione autonoma (ARS); due set di sequenze telomeriche di lievito (TEL); marcatori di resistenza per stabilire una selezione positiva in E.Coli; un sito ORI; siti di restrizione unici; marcatori di selezione auxotrofica (ura3, leu2, his3).

Possono accettare inserti grandi fino a 2Mb!  componenti essenziali di un vettore YAC sono: un centromero di lievito (CEN); una sequenza di replicazione autonoma (ARS); due set di sequenze telomeriche di lievito (TEL); marcatori di resistenza per stabilire una selezione positiva in E.Coli; un sito ORI; siti di restrizione unici; marcatori di selezione auxotrofica (ura3, leu2, his3).

Una delle principali differenze tra i vettori plasmidici e quelli di lievito risiede nei marcatori di selezione.A differenza dei batteri, infatti, i lieviti sono molto meno resistenti agli antibiotici e la selezione viene di solito effettuata sfruttando la complementazione di mutazioni auxotrofiche nel ceppo di lievito ospite.

In questo caso il DNA bersaglio è parzialmente idgerito da EcoRI e il vettore YAC è rotto da EcoRI e BamHI. I segmenti del vettore vengono uniti al frammento di DNA per formare un cromosoma artificiale e si trasformano le cellule di lievito per fare un grande numero di copie.