Pirosequenziamento La rilevazione del nucleotide che viene incorporato si manifesta attraverso il rilascio di pirofosfato. Fatto dall’università di Stoccolma nel 1996. Estremamente rapido, elevatissima accuratezza e riproducibilità (99%), permette il real time sequencing con risultati che dalla processazione del campione al risultato finale ci vogliono solo 2 ore. Tecnica partita con lo studio degli sNIP […]
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Ago
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Avviene l’idrolisi di un legame fosfo-anidride tra il P in α del nucleotide trifosfato entrante e il P in β e l’energia che si libera viene usata per formare un legame fosfodiestere, si libera pirofosfato che poi viene degradato a 2-ortofosfato da una pirofosfatasi inorganica, quindi la reazione non è reversibile. Prima di tutto però bisogna avere l’appaiamento delle basi.