La particolarità è che si usa un primer disegnato in modo tale da avere un sito di restrizione quindi il primer si lega alla sua sequenza specifica, la DNA polimerasi allunga il primer, un enzima di restrizione taglia il primer in corrispondenza delle sequenze di riconoscimento del sito, la DNA polimerasi ripara il taglio e ricostruisce il primer spiazzando quello pre-esistente.
La particolarità è che si usa un primer disegnato in modo tale da avere un sito di restrizione quindi il primer si lega alla sua sequenza specifica, la DNA polimerasi allunga il primer, un enzima di restrizione taglia il primer in corrispondenza delle sequenze di riconoscimento del sito, la DNA polimerasi ripara il taglio e ricostruisce il primer spiazzando quello pre-esistente.
Un'applicazione di questa tecnica è stata usata per clamidia trachomatis e di neisseira gonorrea due dei patogeni più trasmessi sessualmente, la bontà di questa metodica non è elevata per la trachomatis mentre funziona meglio per la neisseria gonorreae.
Ciclo della clamidia:
Germe particolare a lungo considerato un virus per le sue modalita di parassitismo, perchè parassita metabolico cioè ha bisogno dell'apparato metabolico della cellula ospite.
Due forem:
• corpo elementare: più piccolo ed è la forma infettiva che quindi parassita la cellula epiteliale entra all'interno della cellula sfrutta l'apparato metabolico della cellula ospite e comincia a formare inclusioni che formeranno il corpo reticolato
• corpo reticolato: forma capace di replicarsi attivamente all'interno della cellula, una volta che questa replicazione ha raggiunto una maturazione cominciano a formarsi nuovamente i corpi elementari che fuoriusciranno per lisi dalla cellula ecco perchè ricordano il ciclo dei virus ma è un batterio con parete diversa rispetto a quelli convenzionali (non è una forma infettiva è più grosso e più denso)
Generalmente viene fatto in piccoli tubini con un po' di substrato di vetro dove vengono fatti aderire uno strato di cellule epiteliali che poi per centrifugazione del campione favoriamo l'infezione, poi questo vetrino può essere tolto da questi tubini per fare magari una fluorecenza in situ con anticorpi rivolti verso i corpi elementari.
