Questa tecnica cromatografica liquido-liquido viene anche definita cromatografia di esclusione molecolare e viene usata per separare i vari componenti di una miscela in funzione delle loro dimensioni molecolari. Come fase stazionaria vengono usati i Sephadex®, sostanze di natura polisaccaridica (destrani) che formano dei reticoli tridimensionali. I Sephadex® si presentano come delle piccole sferette (dell’ordine dei decimi […]
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È il trasferimento e immobilizzazione di un campione di acidi nucleici su un supporto solido (in genere nitrocellulosa o nylon). Southern blotting: Il gel di agarosio contenente il DNA da trasferire viene posto su un ponte di carta da filtro, le cui estremità pescano all’interno di un recipiente contenente il tampone di trasferimento. La membrana viene posta in contatto con […]
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esistono diverse tipologie di blotting: Western Blotting: Le proteine separate in elettroforesi (SDS-PAGE) possono essere trasferite su un foglio di nitrocellulosa. Il trasferimento, di solito, si effettua per elettroblotting: il gel e la nitrocellulosa vengono posti in un apposito supporto a forma di sandwich immerso in un tampone nel quale ci sono due elettrodi paralleli. La corrente […]
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I gel di acrilammide sono preparati facendo polimerizzare monomeri di acrilammide in presenza di piccole quantità di N,N’-metilenbisacrilammide. La polimerizzazione inizia con l’aggiunta di ammonio persolfato (APS) e TEMED. Il TEMED catalizza la decomposizione dello ione persolfato: si producono radicali liberi che attaccano i monomeri di acrilammide e ne avviano la polimerizzazione. I gel denaturanti contengono, inoltre, anche SDS, […]
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