Che cos’è il metodo di Sanger Questo metodo coinvolge la sintesi di nuovi filamenti di DNA complementari ad uno stampo a singolo filamento. Nel sequenziamento a terminazione di catena la reazione, oltre ad uno stampo a singola elica, ha bisogno di: un innesco specifico (primer); la marcatura con un desossinucleotide-trifosfato marcato di solito con 32S; una […]
Archivio Tag: polimerasi
06
Set
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L’esistenza e il ruolo biologico del codice genetico furono dimostrati dieci anni dopo la pubblicazione del modello del DNA di Watson e Crick. La specificazione di un polipeptide da parte di una molecola di DNA avviene indirettamente, attraverso l’intermediazione di una molecola nota come RNA messaggero (mRNA).
12
Ago
Ago
Avviene l’idrolisi di un legame fosfo-anidride tra il P in α del nucleotide trifosfato entrante e il P in β e l’energia che si libera viene usata per formare un legame fosfodiestere, si libera pirofosfato che poi viene degradato a 2-ortofosfato da una pirofosfatasi inorganica, quindi la reazione non è reversibile. Prima di tutto però bisogna avere l’appaiamento delle basi.
26
Set
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Che cos’è una reazione a cetena della polimerasi Il suo nome originale è Polymerase Chain Reaction, abbreviata in PCR. Consiste in una metodica di Biologia Molecolare che permette l’amplificazione di una regione specifica di DNA mediante cicli ripetuti di replicazione a temperature differenti. La PCR è stata messa a punto negli anni ’80 da Mullis […]
25
Set
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Materiale richiesto per PCR Pcr materiale ed equipaggiamento e materiali richiesti: Dna stampo (0.1 g/ μl ), Primer diretto (10 M ), Primer opposto (10 M ), Taq Dna polimerasi ( 5U/ μl ), Tampone 10x, Mix di dNTP (10 mM di ciascun dNTP ), MgCl2 25 mM, cofattore per la Taq, Acqua priva di […]