Archivio Autore: Marco

Le cellule batteriche vengono mescolate con il DNA ricombinante plasmidico; il mix ottenuto viene posto in cuvette munite di elettrodi connessi ad un alimentatore; si induce un breve impulso elettrico che apre transitoriamente dei pori nella membrana cellulare attraverso i quali entra il plasmide.    

Il DNA può essere incorporato entro vescicole lipidiche artificiali dette liposomi.In questo caso le cariche del DNA sono schermate e la vescicola lipidica, fondendosi con la membrana batterica, permette l'ingresso del DNA nella cellula. È stato sviluppato un certo numero di metodi allo scopo di incapsulare il DNA in doppi strati lipidici sintetici che assomigliano […]

Un cosmide è un plasmide di circa 5kB, contenente un sito COS; permette di inserire fino a 45kB di DNA e possiede un'origine di replicazione e un gene per la farmacoresistenza. Questo vettore è la combinazione di un vettore plasmidico e il sito COS che permette l'ingresso del DNA bersaglio nella testa del fago λ. […]

Possono accettare inserti grandi fino a 2Mb!  componenti essenziali di un vettore YAC sono: un centromero di lievito (CEN); una sequenza di replicazione autonoma (ARS); due set di sequenze telomeriche di lievito (TEL); marcatori di resistenza per stabilire una selezione positiva in E.Coli; un sito ORI; siti di restrizione unici; marcatori di selezione auxotrofica (ura3, […]

Molte proteine che possono essere usate per trattamenti medici sono normalmente espresse in concentrazioni basse. Attraverso la tecnologia del DNA ricombinante, una grande quantità di proteine può essere prodotta. Ciò coinvolge il clonaggio del gene che codifica per la proteina, in un vettore di espressione,che deve contenere un promotore per far sì che la proteina […]

Si digerisce la proteina d'interesse e si fa il sequenziamento degli aminoacidi; da questo si ricava la possibile sequenza del DNA, tenendo presente che il codice genetico è degenerato. Delle sequenze di DNA ottenute una è complementare alla sequenza codificante. All'estremità 5' dell'oligonucleotide sintetizzato può essere aggiunta una ATP con il 32P in γ radiomarcato. […]

L'editing è dovuto all'espressione da parte delle cellule di uno specifico enzima che può essere una citidina deaminasi o una citidina deaminasi. La adenina deaminasi deamina nucleotidi adeninici in particolari sequenze trasformandola in una inosina; mentre la citidina deaminasi trasforma le citidine in uridine.