Categoria: Tecniche di Laboratorio

Sequenziamento

Il sequenziamento  del  DNA consiste  in  una  reazione  di  PCR  modificata  in  cui  viene  inserito  un reagente  in  più,  cioè  una  miscela  di  4  terminatori  marcati  con  quattro  diversi  fluorocromi  e  il  cui template...

Reazione a Catena della Polimerasi

La Polymerase  Chain  Reaction  (PCR)  è  una  metodica  di  Biologia  Molecolare  che  permette l’amplificazione di una regione specifica di DNA mediante cicli ripetuti di replicazione a temperature differenti. La PCR è stata messa a...

Estrazione di Acidi Nucleici

La  metodica classica di  estrazione del  DNA da campioni  biologici è l’estrazione fenolica. Si  deve preventivamente ottenere la lisi cellulare  del  campione  mediante  frantumazione  manuale  oppure tramite trattamento  con  il  freddo; si  utilizzano  solventi  chimici ...

Purificazione delle Proteine

Nei primi passaggi di purificazione delle proteine è spesso utile impiegare tecniche non cromatografiche di frazionamento selettivo, ad alta capacità. Frazionamento con sali. Si basa sulla precipitazione delle proteine per ‘salting out’. I sali ad...

Estrazione di Proteine

La localizzazione delle proteine da purificare influenza le metodiche che possono essere impiegate per ottenere un estratto grezzo di partenza. Per le proteine solubili extracellulari, cioè secrete in fluidi extracellulari (brodo di coltura nel caso...

Dosaggio Proteico

Per la determinazione della concentrazione totale di proteina in una miscela sono disponibili molte tecniche, di cui descriviamo le più comuni. Parecchi di questi metodi non forniscono un concentrazione assoluta ma relativa rispetto ad...

Frazionamento

La centrifugazione è una tecnica separativa basata sulle differenze di densità e dimensioni tra le particelle presenti in una miscela. L’equazione fondamentale che descrive la velocità di sedimentazione di una particella in sospensione.  Esiste un’...

PCR Materiale Necessario

pcr materiale ed equipaggiamento e materiali richiesti: • Dna stampo (0.1  g/  μl ), • Primer  diretto  (10   M ), • Primer  opposto  (10  M ), • Taq Dna polimerasi ( 5U/ μl ),...

Elettroforesi Dna Plasmidico

il Dna plasmidico può essere separato ed analizzato tramite diverse tecniche che riporto di seguito. una di queste è una tecnica di separazione basata sul movimento di molecole cariche in un campo elettrico. Sotto...

Dna Plasmidico

Crescita della coltura batterica, Preparare  il liquido LB medium. Luria-Bertani Medium è un ricco brodo per la crescita di E. coli  costituito da : • Triptone 10g, • Estratto di lievito 5g, • NaCl 10...